Діагностика Covid-19. Перевірено дослідним шляхом

10 листопада 2020, 11:25
Новини компаній
Вы также можете прочесть этот материал на русском языке
Сідорова Ірина В’ячеславівна, медичний директор Медичної лабораторії ДІЛА (Фото:ДІЛА)

Сідорова Ірина В’ячеславівна, медичний директор Медичної лабораторії ДІЛА (Фото:ДІЛА)

Історія пізнання незмінна — чим більше знань і досвіду, тим більше роздумів і питань.

За 7 місяців пандемії COVID-19 діагностичні підходи розібрані до дрібниць, але різні життєві ситуації змушують шукати найкраще, щоб отримати відповіді на питання: Де шукати? Як шукати? Якому дослідженню віддати перевагу?

Досвід лабораторії ДІЛА в діагностиці COVID-19 з 23 березня 2020 року і 200 тис. проведених досліджень підтверджують інформативність і практичну доцільність рекомендацій як ВООЗ (Всесвітня Організація Охорони Здоров’я), так і CDC (Центр по контролю захворювань, США). Як це працює?

Пропоную розглянути послідовно.

Словник діагностичних термінів:

ПЛР РНК Sars-CoV-2 — діагностичний тест високої аналітичної чутливості і автоматичної детекції результату.
Антиген Sars-CoV-2 — якісний експрес-тест з «візуальною» оцінкою результату.
Антитіла до Sars-CoV-2 — імуноферментне визначення імуноглобулінів класів A, G, M, який виробляється організмом в противірусній відповіді.
Чутливість — здатність дослідження виявити інфікованих Sars-CoV-2 пацієнтів.
Специфічність — здатність дослідження виявляти саме вірус Sars-CoV-2, а не інші коронавіруси.

У гострому періоді шукаємо збудника, тому що потрібно вибрати правильну тактику лікування і визначитися з протиепідемічними заходами.

Для цих цілей необхідні клітини, які з найбільшою ймовірністю містять вірусні РНК. Респіраторні віруси колонізують в першу чергу клітини епітелію дихальних шляхів. Місце найбільшої концентрації вірусу SARS-Cov2 — бронхи, бронхіоли та інтерстиційна тканина легені (тому бронхо-альвеолярний лаваж — ідеальний матеріал). Але найдоступніші точки взяття матеріалу — носоглотка і ротоглотка, з яких беруть зіскрібки.

Вірус з кожним днем проникає все глибше. Тому в зіскрібках легше знайти SARS-CoV-2 в перші дні клінічного прояву захворювання. Якщо все ж таки цього не вийшло, ВООЗ в своїх останніх рекомендаціях від 11.09.20 р. вже з другого тижня від початку клінічної картини рекомендує шукати вірус в фекальному матеріалі. Це можливо тільки в разі, якщо методики лабораторії мають валідацію з даного виду біоматеріалу.

Влітку науковим співтовариством розглядалася слина як один з альтернативних і оптимальних видів біоматеріалу. Однак наші внутрішні дослідження на 60 пацієнтах паралельного тестування слини і зіскрібків продемонстрували 20-ти відсоткову втрату позитивних результатів.

Отже, беремо з двох точок, щоб збільшити шанси. Зіскріб — процедура не з приємних тому, що важливо взяти якомога більше клітинного матеріалу. Відсутність місцевих процедур і прийому їжі не менше (а краще більше), ніж за 2 години до проведення зіскрібка, підвищує результативність нашого пошуку.

З найбільшою вірогідністю виявляють збудника в зразку методи ампліфікації нуклеїнових кислот (АНК). Загальновизнаний і перевірений еталон пошуку SARS-CoV-2 — ПЛР (полімеразно-ланцюгова реакція).

Технологічно метод передбачає багаторазову — сотні тисяч разів — мультиплікацію (ампліфікацію) вірусних РНК в зразку біоматеріалу з подальшим зчитуванням рівня вірусного навантаження — детекцією. Для чого це робиться? Щоб виявити навіть поодинокі вірусні частинки в зразку біоматеріалу.

Саме в технології визначення і полягає основна відмінність від методу виявлення антигену, коли немає такого «розмноження», а виконується пряме визначення вірусної присутності в зіскрібку.

З характером виконання тесту зв’язана на 20−40% менша чутливість детекції антигену — здатність виявити інфікованого вірусом пацієнта. А значить негативний результат антигену не виключає факт наявності вірусу і вимагає повторного тестування більш чутливим методом ПЛР (400 копій/мл).

Однак потрібно визнати досить високі рівні специфічності (здатність виявляти саме вірус SARS-CoV-2) антигену (до 97%), що робить дослідження корисним в обстеженні груп осіб з високою ймовірністю інфікування — в замкнутих осередках стаціонарів, будинків для людей похилого віку, в’язницях, церковних громадах та ін. Позитивний результат в даних випадках не вимагає підтвердження (огляд ВООЗ від 11.09.20 р.).

Чого не скажеш про обстеження в місцях найменшої прогностичної ймовірності - контроль для перетину кордонів, відділення приватних лабораторій, де проводиться взяття біоматеріалу (інфіковані COVID-19 частіше обстежуються у державних закладах за державною програмою), профілактичні тестування робочих колективів. У таких випадках обов’язкове підтвердження методом ПЛР позитивних зразків антигену (ВООЗ, Наказ МОЗ України № 722 зі змінами від 05.10.2020 р.).

Важливо: будь-яка тест-система провідного виробника — європейського, американського, китайського, корейського і т.ін., відповідно до ISO 15189, перед запуском в серійне роботу повинна бути валідована (оцінена) на контрольних клінічних зразках. З досвіду: у виборі тест-систем для ПЛР SARS-CoV-2 перевірили 15 різних тест-систем, перш ніж вибрали кращу для досягнення максимальної діагностичної точності.

Отже, підготувалися, правильно взяли біоматеріал, зберегли і транспортували, вибрали оптимальний метод виявлення, провели дослідження на кращих тест-системах. А що, якщо все ж таки не знайшли, а клінічні прояви характерні?

В арсеналі сучасної лабораторії широкий вибір діагностичних інструментів, правильне їх використання дозволяє отримувати відповіді на актуальні клінічні завдання.

В цьому випадку виправдано включення в пошук антитіл. Дослідження показали, що максимальне виявлення тільки РНК вірусу на 1−7 день клінічних проявів (близько 67%). Одночасне використання РНК і антитіл з 8-го дня захворювання істотно підвищує виявлення вірусу — 95% і більше. Особливо інформативне поєднання ПЛР і визначення т.зв. загальних антитіл — об'єднання всіх антитіл (класів M, G) в одне дослідження. Технологічний прийом, який дозволяє домогтися більшої аналітичної чутливості загальних антитіл, ніж цих же антитіл, але виконаних окремо. Додавання до комплексу G + M антитіл класу А прогнозує успішність діагностичного пошуку вже починаючи з 3-го дня клінічних проявів. У вересні ми запустили таке комплексне дослідження і обов’язково поділимося нашими враженнями.

А ось для моніторингу імунної відповіді, напрацювання «імунологічного паспорта» діагностично значимі окремі антитіла G і M, бажано в кількісному форматі.

Не виключено, що антитіла до SARS-CoV-2 також не будуть знайдені. Діапазон відмінностей імунологічної відповіді при COVID-19 досить широкий. І тут саме час згадати про наших давніх знайомих — грип, парагрип, мікоплазму, риновіруси і т.ін. З листопада ми запропонуємо дослідження на 21 збудник респіраторної групи, яке, очікувано, стане тим відсутнім шматочком пазла в респіраторній картині 2020 року.

Відсутність клінічної картини і необхідність розуміння власної контагіозності (заразність) для госпіталізації, перетину кордонів, виконання професійної діяльності (медичні працівники, співробітники правоохоронних органів, освітніх установ та ін.).

Рішення в пошуку збудника методом з максимальним відгуком, тому що вірус може безсимптомно перебувати в організмі в невеликих концентраціях. ПЛР відповідає цій умові, на відміну від методу визначення антигену з високою часткою ймовірності помилково негативних результатів.

Непрямим варіантом, що дозволяє запідозрити інфікування, є визначення антитіл гострої фази класу М, рідше — А. В цьому випадку позитивний результат буде вимагати ПЛР-підтвердження.

І нарешті, відповідь на питання: а раптом я вже безсимптомно перехворів/перехворіла?

Класичне показання для пошуку специфічних до SARS-CoV-2 імуноглобулінів класу G. Дослідження G стали доступні влітку 2020 р. Перші щасливі володарі позитивних результатів заспокоїли свою ковід-настороженість, проте передчасно. З вересневою хвилею частина їх перехворіла вже з яскравою клінічною симптоматикою. Відповідь не тільки в активно дискутованому реінфікуванні (повторне інфікування), а й у недостатній специфічності перших доступних тест-систем на антитіла. Інтерференція з іншими коронавірусами призводила до хибнопозитивних результатів. Наступні генерації реагентів визначення антитіл постаралися цей недолік усунути.

В арсеналі сучасної лабораторії широкий вибір діагностичних інструментів, правильне їх використання дозволяє отримувати відповіді на актуальні клінічні завдання.

Правова інформація. Ця стаття містить загальні відомості довідкового характеру і не повинна розглядатися як альтернатива рекомендаціям лікаря. НВ не несе відповідальності за будь-який діагноз, поставлений читачем на основі матеріалів сайту. НВ також не несе відповідальності за зміст інших інтернет-ресурсів, посилання на які присутні в цій статті. Якщо вас турбує стан вашого здоров’я, зверніться до лікаря.

poster
Підписатись на щоденну email-розсилку
матеріалів розділу Здоров'я
Головні новини про здоров’я, фітнес та харчування
Щосуботи

Приєднуйтесь до нас у соцмережах Facebook, Telegram та Instagram.

Показати ще новини
Радіо НВ
X